1. Účel: Tento postup si klade za cíl poskytnout standardizovaný postup pro aseptické operace a ochranu sterilních prostor.
2. Oblast použití: biologická testovací laboratoř
3. Odpovědná osoba: Vedoucí tester kontroly kvality
4. Definice: Žádná
5. Bezpečnostní opatření
Přísně dodržujte aseptické postupy, aby se zabránilo mikrobiální kontaminaci; obsluha by měla před vstupem do sterilní místnosti vypnout UV lampu.
6. Postupy
6.1. Sterilní místnost by měla být vybavena sterilním operačním sálem a vyrovnávací místností. Čistota sterilního operačního sálu by měla dosahovat třídy 10000. Vnitřní teplota by měla být udržována na 20–24 °C a vlhkost by měla být udržována na 45–60 %. Čistota čistého lavice by měla dosahovat třídy 100.
6.2 Sterilní místnost by měla být udržována v čistotě a je přísně zakázáno hromadit odpadky, aby se zabránilo kontaminaci.
6.3. Důsledně zabraňte kontaminaci veškerého sterilizačního vybavení a kultivačních médií. Ti, kteří jsou kontaminováni, by je měli přestat používat.
6.4. Sterilní místnost by měla být vybavena dezinfekčními prostředky v pracovní koncentraci, jako je 5% roztok kresolu, 70% alkohol, 0,1% roztok chlormethioninu atd.
6.5 Sterilní místnost by měla být pravidelně sterilizována a čištěna vhodným dezinfekčním prostředkem, aby se zajistilo, že čistota sterilní místnosti splňuje požadavky.
6.6. Všechny nástroje, pomůcky, nádobí a další předměty, které je třeba přinést do sterilní místnosti, by měly být pevně zabaleny a sterilizovány vhodnými metodami.
6.7. Před vstupem do sterilní místnosti si musí personál umýt ruce mýdlem nebo dezinfekčním prostředkem a poté se v místnosti s ochrannými pomůckami převléknout do speciálního pracovního oděvu, obuvi, pokrývek hlavy, roušek a rukavic (nebo si před vstupem do sterilní místnosti znovu otřít ruce 70% etanolem). Operace provádějte v bakteriální komoře.
6.8. Před použitím sterilní místnosti musí být zapnuta ultrafialová lampa pro ozařování a sterilizaci po dobu delší než 30 minut a zároveň musí být zapnuto čištění stolu pro foukání vzduchu. Po dokončení operace je třeba sterilní místnost včas vyčistit a poté sterilizovat ultrafialovým světlem po dobu 20 minut.
6.9. Před kontrolou by měl být vnější obal testovaného vzorku uchován neporušený a nesmí být otevřen, aby se zabránilo kontaminaci. Před kontrolou dezinfikujte vnější povrch vatovými tampony se 70% alkoholem.
6.10. Během každé operace by měla být provedena negativní kontrola, aby se ověřila spolehlivost aseptického provozu.
6.11. Při nasávání bakteriální tekutiny musíte k jejímu nasávání použít sací kuličku. Nedotýkejte se brčka přímo ústy.
6.12. Inokulační jehla musí být sterilizována plamenem před a po každém použití. Po vychladnutí lze kulturu inokulovat.
6.13. Brčka, zkumavky, Petriho misky a další náčiní obsahující bakteriální tekutinu by měly být namočené do sterilizačního kbelíku s 5% roztokem Lysolu pro dezinfekci a po 24 hodinách vyjmuty a opláchnuty.
6.14. Pokud se na stole nebo podlaze rozlije bakteriální tekutina, měli byste na kontaminované místo okamžitě nalít 5% roztok kyseliny karbolové nebo 3% Lysol a působit alespoň 30 minut před ošetřením. Pokud jsou pracovní oděvy a pokrývky hlavy kontaminovány bakteriální tekutinou, měly by být po sterilizaci vysokotlakou párou okamžitě svléknuty a vyprany.
6.15. Všechny předměty obsahující živé bakterie musí být před opláchnutím pod tekoucí vodou dezinfikovány. Je přísně zakázáno znečišťovat kanalizaci.
6.16. Počet kolonií ve sterilní místnosti by měl být kontrolován měsíčně. S otevřeným čistým stolem vezměte několik sterilních Petriho misek o vnitřním průměru 90 mm a asepticky do nich vstříkněte asi 15 ml živného agarového kultivačního média, které bylo roztaveno a ochlazeno na přibližně 45 °C. Po ztuhnutí je otočte dnem vzhůru při teplotě 30 až 35 °C. Inkubujte 48 hodin v inkubátoru při teplotě 30 až 35 °C. Po ověření sterility vezměte 3 až 5 misek a umístěte je do levé, střední a pravé části pracovní polohy. Po otevření víka a jejich 30minutové expozici je umístěte dnem vzhůru do inkubátoru při teplotě 30 až 35 °C na 48 hodin a poté je vyjměte. Průměrný počet různých bakterií na misce v čisté oblasti třídy 100 nesmí překročit 1 kolonii a průměrný počet v čisté místnosti třídy 10 000 nesmí překročit 3 kolonie. Pokud je limit překročen, měla by být sterilní místnost důkladně dezinfikována, dokud opakované kontroly nesplňují požadavky.
7. Viz kapitola (Metoda kontroly sterility) v dokumentech „Metody kontroly hygieny léčiv“ a „Čínské standardní operační postupy pro kontrolu léčiv“.
8. Distribuční oddělení: Oddělení řízení kvality
Technické pokyny pro čisté prostory:
Po dosažení sterilního prostředí a sterilních materiálů musíme udržovat sterilní stav, abychom mohli studovat specifický známý mikroorganismus nebo využívat jeho funkce. Jinak se mohou snadno vmísit různé mikroorganismy zvenčí. Fenomén vmísení irelevantních mikroorganismů zvenčí se v mikrobiologii nazývá kontaminující bakterie. Prevence kontaminace je v mikrobiologické práci kritickou technikou. Úplná sterilizace na jedné straně a prevence kontaminace na straně druhé jsou dva aspekty aseptické techniky. Kromě toho musíme zabránit tomu, aby studované mikroorganismy, zejména patogenní mikroorganismy nebo geneticky modifikované mikroorganismy, které v přírodě neexistují, unikaly z našich experimentálních nádob do vnějšího prostředí. Pro tyto účely existuje v mikrobiologii mnoho opatření.
Sterilní místnost je obvykle malá místnost speciálně zřízená v mikrobiologické laboratoři. Může být postavena z fólií a skla. Plocha by neměla být příliš velká, asi 4-5 metrů čtverečních, a výška by měla být asi 2,5 metru. Před sterilní místností by měla být zřízena vyrovnávací místnost. Dveře vyrovnávací místnosti a dveře sterilní místnosti by neměly směřovat stejným směrem, aby se zabránilo proudění vzduchu do vnášení různých bakterií. Sterilní místnost i vyrovnávací místnost musí být vzduchotěsné. Vnitřní ventilační zařízení musí být vybaveno filtračními zařízeními. Podlaha a stěny sterilní místnosti musí být hladké, odolné vůči usazování nečistot a snadno čistitelné. Pracovní plocha by měla být rovná. Sterilní místnost i vyrovnávací místnost jsou vybaveny ultrafialovými světly. Ultrafialová světla ve sterilní místnosti jsou umístěna 1 metr od pracovní plochy. Personál vstupující do sterilní místnosti by měl nosit sterilizované oblečení a pokrývky hlavy.
V současné době se sterilní místnosti nacházejí převážně v mikrobiologických továrnách, zatímco běžné laboratoře používají čisté pracovní stoly. Hlavní funkcí čistých pracovních stolů je použití laminárního zařízení pro proudění vzduchu k odstranění různých drobných prachů včetně mikroorganismů z pracovní plochy. Elektrické zařízení umožňuje průchod vzduchu přes HEPA filtr a poté vstup na pracovní plochu, takže pracovní plocha je neustále pod kontrolou proudícího sterilního vzduchu. Navíc je na straně blízko vnější strany umístěna vysokorychlostní vzduchová clona, která zabraňuje vniknutí vnějšího bakteriálního vzduchu.
V místech s obtížnými podmínkami lze místo čistého stolu použít také dřevěné sterilní boxy. Sterilní box má jednoduchou konstrukci a snadno se s ním manipuluje. Na přední straně boxu jsou dva otvory, které jsou v nečinnosti blokovány push-pull dvířky. Během provozu můžete dovnitř natáhnout ruce. Horní část přední části je opatřena sklem pro usnadnění vnitřního ovládání. Uvnitř boxu je ultrafialová lampa a malými dvířky na boku lze do něj vkládat nádobí a bakterie.
Aseptické operační techniky v současnosti hrají nejen klíčovou roli v mikrobiologickém výzkumu a aplikacích, ale jsou také široce používány v mnoha biotechnologiích. Například v transgenních technologiích, technologiích monoklonálních protilátek atd.
Čas zveřejnění: 6. března 2024