1. Účel: Cílem tohoto postupu je poskytnout standardizovaný postup pro aseptické operace a ochranu sterilních místností.
2. Rozsah aplikace: Biologické testování laboratoře
3. Odpovědná osoba: Tester supervizora QC
4. Definice: Žádné
5. Bezpečnostní opatření
Přísně provádějí aseptické operace, aby se zabránilo mikrobiální kontaminaci; Provozovatelé by měli před vstupem do sterilní místnosti vypnout UV lampu.
6. Procedury
6.1. Sterilní místnost by měla být vybavena sterilním operačním pokojem a vyrovnávací místností. Čistota sterilní operační místnosti by měla být dosažena třídy 10000. Vnitřní teplota by měla být udržována při 20-24 ° C a vlhkost by měla být udržována na 45-60%. Čistota čisté lavičky by měla dosáhnout třídy 100.
6.2. Sterilní místnost by měla být udržována čistá a je přísně zakázáno hromadit zbytky, aby se zabránilo kontaminaci.
6.3. Přísně zabrání kontaminaci všech sterilizačních zařízení a kultivačního média. Ty, které jsou kontaminovány, by je měly přestat používat.
6.4. Sterilní místnost by měla být vybavena dezinfekčními prostředky pracovní koncentrace, jako je 5% roztok kresolu, 70% alkoholu, 0,1% chlormethioninového roztoku atd.
6.5. Sterilní místnost by měla být pravidelně sterilizována a čištěna s vhodným dezinfekčním prostředkem, aby se zajistilo, že čistota sterilní místnosti splňuje požadavky.
6.6. Všechny nástroje, nástroje, nádobí a další předměty, které je třeba přivést do sterilní místnosti, by měly být pevně zabaleny a sterilizovány vhodnými metodami.
6.7. Před vstupem do sterilní místnosti si musí personál umyt ruce mýdlem nebo dezinfekčním prostředkem a poté se před vstupem do sterilní místnosti přeměnit na speciální pracovní oblečení, boty, klobouky, masky a rukavice v nárazníkové místnosti (nebo znovu otřete ruce 70% ethanolem). Provádět operace v bakteriální komoře.
6.8. Před použitím sterilní místnosti musí být ultrafialová lampa ve sterilní místnosti zapnuta pro ozáření a sterilizaci déle než 30 minut a čistá lavička musí být zapnutá pro foukání vzduchu současně. Po dokončení operace by měla být sterilní místnost včas vyčištěna a poté sterilizována ultrafialovým světlem po dobu 20 minut.
6.9. Před inspekcí by vnější obaly testovacího vzorku mělo být udržováno neporušené a nesmí být otevřeno, aby se zabránilo kontaminaci. Před inspekcí použijte 70% bavlněných kuliček pro alkohol k dezinfikaci vnějšího povrchu.
6.10. Během každé operace by měla být provedena negativní kontrola pro kontrolu spolehlivosti aseptické operace.
6.11. Při absorpci bakteriální kapaliny musíte k její absorpci pomocí sací koule. Nedotýkejte se slámy přímo ústy.
6.12. Inokulační jehla musí být sterilizována plamenem před a po každém použití. Po ochlazení může být kultura naočkována.
6.13. Stramy, testovací zkumavky, Petriho pokrmy a další náčiní obsahující bakteriální kapalinu by měly být namočeny do sterilizačního kbelíku obsahujícího 5% roztoku lysolu pro dezinfekci a vytaženy a propláchnuty po 24 hodinách.
6.14. Pokud dojde k rozlité bakteriální kapalině na stůl nebo podlahu, měli byste okamžitě nalít 5% roztoku kyseliny karbolové nebo 3% Lysol na kontaminovanou oblast po dobu nejméně 30 minut před ošetřením. Když jsou pracovní oblečení a klobouky kontaminovány bakteriální tekutinou, měly by být okamžitě odvezeny a po vysokotlaké sterilizaci parní sterilizace.
6.15. Všechny položky obsahující živé bakterie musí být dezinfikovány před propláchnutím pod kohoutem. Je přísně zakázáno znečišťovat kanalizaci.
6.16. Počet kolonií ve sterilní místnosti by měl být kontrolován měsíčně. S otevřenou čistou lavicí si vezměte řadu sterilních Petriho jídel s vnitřním průměrem 90 mm a asepticky vstříkněte asi 15 ml kultivačního média živného agaru, které se roztavilo a ochladilo na asi 45 ° C. Po ztuhnutí jej umístěte vzhůru nohama při 30 až 35 inkubujte po dobu 48 hodin do inkubátoru ℃. Po prokázání sterility vezměte 3 až 5 desek a umístěte je na levou, uprostřed a vpravo od pracovní pozice. Po otevření krytu a jejich vystavení po dobu 30 minut je umístěte vzhůru nohama do inkubátoru 30 až 35 ° C po dobu 48 hodin a vytáhněte je. přezkoumat. Průměrný počet různých bakterií na desce v čisté oblasti třídy 100 nesmí překročit 1 kolonii a průměrný počet v čisté místnosti třídy 10000 nesmí překročit 3 kolonie. Pokud je limit překročen, měla by být sterilní místnost důkladně dezinfikována, dokud se opakované inspekce nesplňují požadavky.
7. Viz kapitola (metoda inspekce sterility) v „metodách hygienické inspekce léčiva“ a „standardní provozní postupy pro kontrolu drog“.
8. Distribuční oddělení: Oddělení správy kvality
Technické vedení čisté místnosti:
Po získání sterilního prostředí a sterilních materiálů musíme udržovat sterilní stav, abychom studovali specifický známý mikroorganismus nebo využili jejich funkce. V opačném případě se mohou různé mikroorganismy zvenčí snadno promíchat. Fenomén smíchání irelevantních mikroorganismů zvenčí se v mikrobiologii nazývá kontaminující bakterie. Prevence kontaminace je kritickou technikou v mikrobiologické práci. Úplná sterilizace na jedné straně a prevence kontaminace na druhé straně jsou dva aspekty aseptické techniky. Kromě toho musíme zabránit studovaným mikroorganismům, zejména patogenním mikroorganismům nebo geneticky upraveným mikroorganismům, které v přírodě neexistují, aby unikli z našich experimentálních kontejnerů do vnějšího prostředí. Pro tyto účely existuje v mikrobiologii mnoho opatření.
Sterilní místnost je obvykle malá místnost, která je speciálně zřízena v mikrobiologické laboratoři. Lze postavit s listy a sklem. Oblast by neměla být příliš velká, asi 4-5 metrů čtverečních a výška by měla být asi 2,5 metry. Mimo sterilní místnosti by měla být zřízena vyrovnávací místnost. Dveře nárazníkové místnosti a dveře sterilní místnosti by neměly čelit stejnému směru, aby se zabránilo průtoku vzduchu v přinášení různých bakterií. Sterilní místnost i vyrovnávací místnost musí být vzduchotěsná. Vnitřní ventilační zařízení musí mít zařízení filtrace vzduchu. Podlaha a stěny sterilní místnosti musí být hladké, obtížné ukrývat nečistoty a snadno se čistit. Pracovní plocha by měla být na úrovni. Sterilní místnost i vyrovnávací místnost jsou vybaveny ultrafialovými světly. Ultrafialová světla ve sterilní místnosti jsou 1 metr od pracovního povrchu. Zaměstnanci vstupující do sterilní místnosti by měli nosit sterilizované oblečení a klobouky.
V současné době existují sterilní místnosti většinou v mikrobiologických továrnách, zatímco obecné laboratoře používají čistou lavičku. Hlavní funkcí čisté lavičky je použití laminárního vzduchového průtoku k odstranění různých drobných prachů včetně mikroorganismů na pracovní ploše. Elektrické zařízení umožňuje vzduchu procházet filtrem HEPA a poté vstoupit do pracovní plochy, takže pracovní plocha je vždy udržována pod kontrolou tekoucího sterilního vzduchu. Navíc je na boku blízko vnějšího vzduchu vysokorychlostní vzduchová opona, aby se zabránilo vstupu vnějšího bakteriálního vzduchu.
Na místech s obtížnými podmínkami lze místo čisté lavice použít také dřevěné sterilní krabice. Sterilní krabice má jednoduchou strukturu a snadno se pohybuje. Na přední straně krabice jsou dva otvory, které jsou blokovány dveřmi push-pull, pokud nejsou v provozu. Během operace můžete rozšířit ruce. Horní část přední části je vybavena sklem pro usnadnění vnitřního provozu. Uvnitř krabice je ultrafialová lampa a nádobí a bakterie lze vložit přes malé dveře na boku.
Aseptické operační techniky v současné době hrají nejen klíčovou roli v mikrobiologickém výzkumu a aplikacích, ale také se široce používají v mnoha biotechnologiích. Například transgenní technologie, monoklonální technologie protilátek atd.
Čas příspěvku: Mar-06-2024